ISO14698-1 生物潔凈室及其相關控制環境
目錄
第一部分：臨時標題：生物污染控制——總則 P1
附件A（標準）生物污染測量方法的原則 P11
附錄B（參考）氣懸浮生物污染測量方法指導 P12
附件C（參考）空氣采樣器效率的評估與鑒定指導 P15
附件D（參考）表面生物污染的測量方法指導 P19
附件E（參考）織品生物污染的測量方法指導 P20
附件F（參考）洗衣驗證方法指導 P22
附件G（參考）液體生物污染的測量方法指導 P25
附件H（參考）培訓指導 P26
第二部分：臨時標題：生物污染控制——生物污染數據的評價與說明 P32
第三部分；臨時標題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測量方法 P41
前言
ISO（國際標準化組織）是國家標準機關（ISO成員機關）的全球性聯合會。世界標準的編寫工作通常由ISO技術委員會來完成。每個成員機關如果對專設技術委員會的某個主題感興趣，就有權向該委員會派出代表。凡與ISO有聯系的政府和非政府的國際組織也可參加這項工作。有關電工標準化的各項事宜，ISO正與國際電工委員會進行密切合作。
被技術委員會采用的國際標準草本要發到成員機關進行投票，是否作為國際標準出版要有75%以上的成員機關投票同意。
國際標準14698-1由潔凈室及其相關控制環境技術委員會ISO/TIC 209編寫。
ISO14698的大標題為：潔凈室及其相關控制環境，其構成有以上內容：
第一部分：臨時標題：生物污染控制——總則
第二部分：臨時標題：生物污染控制——生物污染數據的評價與說明
第三部分；臨時標題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測量方法
用戶應當注意，第一至第三部分的標題是第一部分發放時的工作標題，如果從工作計劃中刪去一個以上這樣的標題，剩余部分可重新編號。
附件A是標準性文件，是國際標準的組成部分。附件B到G為參考性文件，提供較為詳細的信息。
附件F（參考）
洗衣驗證方法指導
F．1 引言
本附件提供了指導并描述了在需要生物污染控制的環境下洗衣過程的驗證技術。
F．2 測試方法
F．2．1原則
驗證需要使用若干片與送洗織物同種的材料．以上織物片要經過已測量數量的己知微生物的污染，然后送去經歷要被驗證的洗滌過程。要檢查該過程能否去除105的細菌數和104的酵母和真菌孢子數。
要進行以下控制：
a) 控制A：計數初期微生物懸浮液的話單位。控制A為了表明微生物的量初數量達到一定的高度，以測量是否將微生物降至所需的數量；
b) 控制B：計數控制織物片的活單位數，該織物片除了洗衣過程外．要經歷過與試驗片完全相同的過程。控制B是為了表明微生物的存活性在驗證期間不發生變化；
c） 控制c；計數控制織物片的活單位數，該織物片要經歷過與試驗片完全相同的過程，包括洗衣過程．但只是在洗衣后受到了微生物懸浮液的污染。控制C是為了表明計數微生物數的技術適用于該工藝條件(時間，機械作用，溫度，織物上有無清洗產品殘留物等)。
試驗中已知微生物的懸浮液足以蛋白溶液制備的．試驗片涂上己知量的懸浮液，與普通織物一起送洗．洗完后計數試驗片上的微生物數．測量微生物的減少量并與(F．2．1)中提到的值進行比較．
注：在評估認可對試驗洗衣過程的驗證前，該過程的產品不得用于潔凈室．
F．2．2微生物
F．2．2．1細菌
至少應使用以下細菌菌株：
a)腸球菌hirae ATCCl0541
b)大腸桿菌ATCCl0536
F.2. 2. 2真菌
如果要殺真菌，至少要使用以下真菌菌株：
白色念珠菌ATCC2091
黑曲霉ATCCl6404
F．22 3細菌孢子
如果要殺滅孢子，至少要使用以下菌株孢子；
枯草桿菌黑色變種ATCC9372
F．2．3細菌懸浮液
F．2．3．1懸浮液介質
應使用滅菌胨鹽水作為細菌懸浮液的介質。對于真曲，加005％(容積比)多乙氧基醚。細菌孢子應使用滅菌蒸餾水。
F．2． 2。 3 回收介質
可使用懸浮液介質、蒸餾水或可在試驗條件下被過濾的任何溶液。如果必須用殺菌中和劑，可將其加在回收介質中．
F．2．3．3蛋白溶液
要制備以下溶液：
一溶液A: 3％(W／V)牛清蛋白(Cobh氏餾份v)，需要時調到pH=6．8，采用膜過濾消毒；
一溶液B：15％(W／V)的酵母提取物，調到pH=7，以121℃蒸煮20分鐘：
一溶液C：A和B兩種溶液按100：20的比例混合，使每種蛋白的濃度為2．5％(w/V)。
F．2．4控制與測試織物片
織物片采用脫漿的織物制成，該織物片須代表洗滌過程要驗證的送洗織物．它們只應使用一次。織物片的整個尺寸為l0cm×5cm，包括5x5cm的污染區和用于將其固定于送洗織物的多余邊。
織物片用蒸汽可穿透的材料包裹，以121℃蒸煮20mm。
F．2．5培養液的制備
制備每ml含I09的細菌細胞或108的真菌細胞或細菌孢子懸浮液．
F．2．6程序
F．2．6．1控制
控制A；培養懸浮液經適當稀釋后計數瓊脂培養基中的雙份VU，含育30-300VU／ml的稀釋液中兩個計數的平均值為N。檢查原始懸浮液的數字是否為細菌細胞為≥109／ml真菌細胞或細菌孢子為108／ml．
控制B：使用適當的稀釋液，用含有30-300VU／ml的0.5ml的懸浮液培養兩個控制片，用含有300-3000VU／ml的0.5ml的懸浮液培養另外兩個控制片．這四個控制片在整個試驗過程中，除了不參與洗衣過程，其它時候均與試驗片一起處理和試驗．回到實驗室后，它們要放到培養瓊脂培養基中培養．計數VU．與污染最嚴重的控制片對應的平均計數為N'1，另一個為N’2?
控制C：在一個控制片上涂0,5ml的蛋白溶劑C。進行全過程洗衣．然后浸沒在l00ml回收介質中撞動15-30秒，放到培養皿上沉淀。接著在該控制片上涂含有30-300VU／ml的lml的懸浮液，將其用10ml的瓊脂培養基覆蓋、培養后計數．該計數為n1。用能夠阻擋微生物的濾膜過濾先前使用的100ml回收介質．沖洗三遍，在過濾膜上覆蓋50ml的新回收介質．在50ml的回收介質中加Iml的含30-300VU／ml的懸浮液，然后過濾。膜與過濾器再用另外5ml的回收介質沖洗，然后過濾。
將膜放到瓊脂培養基上培養．該計數為n2計算
n=(n1+n2)/2。
如果N≈N’2≈n，就只為試驗本身驗證實驗條件．
如果N’2≤0.5N和或N’1≤0．05N和／或n≤0．5N，就不只為試驗本身驗證實驗條件．重新進行控制，如添加適當的化合物以中和送洗控制片的化學殘留物．
F．2．6．2測試
將3ml微生物懸浮液(F.2.5)和2ml(F.2.3 3)中的蛋白溶液C混合并在環境溫度下保持接觸5min．將產生的0.5ml的懸浮液涂到試驗片上。為測試每個受試的微生物，要使三個試驗片接受污染．
送洗后，要盡快將控制片送回到實驗室．每一片要放入100ml的回收介質內，攪拌15至30s．
然后：
a)0.1ml放入9.9ml回收介質后攪拌。然后該混合物放到濾膜上．用50ml新回收介質沖洗三次．將膜放到瓊脂培養基上培養；
b)將lml放到濾膜上，用50ml新回收介質沖洗三次，將膜放到瓊脂培養基上培養：
c)剩余的98.9ml放到站膜上，用50ml新回收介質沖洗三次，將膜放到瓊脂培養基上培養：
d)每個試驗片以無菌方式放到一個培養皿上,用瓊脂培養基覆蓋并培養。
n’1為各膜上確定的VU數，是F.2.6.2中a)，b)，c)產生的計數平均值。
n’2是F.2.6.2中d)試驗片確定的VU平均數．
因此是送洗后殘留微生物的數字．
F．2.7結果的解釋
計算涂到控制片上微生物數N與R的比率檢查送洗是否可保證減少細茵數的105因數和減少酵母菌及真菌孢子數104。
附件G（參考）
液體生物污染的測量方法指導
G．1 引言
本附件提供了指導并描述了在需要生物污染控制的環境下液體（水的或非水的）生物污染的評價技術。為了探測存在和可能需要監控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
液體生物污染的評價遵循本標準和附件A的一般原則，它們要求在采用潔凈技術時要建立評價和控制液體生物污染的正式系統。此外，應考慮以下因素[37-43]：
a) 危險區內細菌生態及相關參數；
b) 特定液體中活粒子的希望濃度；
c) 液體條件；
d) 采集的精確性與效率。
G．2 原則
當危險區處于準備就緒、可以使用狀態時，應按正常使用情況下適當和例行的做法通過用適當的采樣裝置按采樣計劃對危險區中液體的細菌污染進行探測和監控。可采用直接或間接技術實施活粒子的數量質量探測。
G．3 過程
確定液體生物污染有各種方法，選擇哪種方法取決于液體的性質和需要采樣的量，比如可以使用灌澆平碟，展寬平碟，膜過濾和其它方法。
采樣時液體壓力要適當降低，應注意液體條件和液體中活單位的期望濃度。
G．3．1 采樣準備
根據液體和生物污染的程度，試樣的測試可直接或在適當處理后進行。
G．3．2 采樣
選擇的生物污染探測方法應與要采樣液體的性質相適應，可能需要以下技術：
a） 直接培養，如展寬平碟，系列稀釋（MPN方法）；
b） 間接培養，如采用膜過濾方法的采樣濃度，該法有后續培養或帶放射標簽基質及放射活性測量；
c） 細菌ATP測量；
d） 阻抗測量。
G．4 結果表述
建議表面活粒子數的表述采用活單位（VU），推廣到1ml(或1cm3)。
附件H（參考）
培訓指導
H．1 引言
本附件提供指導并描述潔凈室生物污染控制和相關控制環境下人員培訓的適當技術。
對質量管理各項內容的基本貢獻和關鍵是對按本標準使用選用系統人員進行連續、有組織和適當的培訓。各有關人員須經過適當培訓，以保證一致、可靠和可重復的結果和服務提供。要對參與微生物監控和實驗室分析的人員，包括分包商的人員，給與適當的培訓。
培訓要求編寫可用的規程和配有文件的培訓材料，記錄使用的性能成分及培訓驗證系統[44]。培訓可在機構內實施或由獨立機構在外部實施。
本附件不提供能力評價、表現水平、表現評價或完整人員培訓的標準，而用于指出生物污染控制領域或培訓和驗證周期中包括的最重要活動和內容。
H．2 標準化培訓的內容
凡規程保證之處都要編寫培訓文件，該文件要詳細說明單個步驟或程序。第一步應進行細分以充分描述以上步驟所需的培訓范圍和內容。
H．2．1 培訓文件
培訓文件應考慮以下方面：
a） 培訓中要用的文件和參考項列表；
b） 要使用的培訓目標及方法的說明與定義；
c） 每個程序步驟的詳細說明，以充分理解實施該步驟的要求；
d） 必要時的測量結果；
e） 計劃的培訓課程，是否在內部還是設施外；
f） 性能標準評價的說明。
應為選定的系統編寫統一的培訓手冊，而非為每個程序或試驗編制單獨的指南。應采用統一文件格式，重點在有關程序上，避免過多綜合性的背景介紹。
H．2．2 培訓手冊
部門或組織就將有關某個區域或設施的各培訓文件分成單個手冊，以作為培訓手冊。這一手冊應將程序的細節轉成單獨的、可清楚理解的步驟，并使之標準化，以達到合格的性能。
培訓手冊一般應用于以下目的：
a） 培訓新雇員；
b） 采用新方法、儀表和采樣裝置；
c） 良好的微生物/衛生作法和實驗室安全；
d） 風險分析；
e） 采樣/監控計劃的改變；
f） 表現欠佳時的再度培訓；
g） 定期驗證。
H．2．3 微生物控制及微生物污染控制程序
對于控制環境內所有人員、負責管理和環境控制計劃一般操作的人個，包括采樣人員和實驗室技術員，正式的培訓計劃應有：
a） 微生物學的基本原理；
b） 應用微生物學、衛生和流行病學的基本原理；
c） 良好的雇員消毒技術和預防措施；
d） 環境控制過程原理；
e） 微生物采樣技術；
f） 微生物危害分析的基本原理；
g） 理解生物污染的目標、報警和行動限量；
h） 趨勢分析原理；
i） 各項要求實驗方法和用于幫助細菌識別的專門化培訓；
j） 清楚的報告編寫。
H．3 培訓確認
確認應向用戶保證培訓已進行并制作了文件。對人員已進行了指定系統培訓的確認應根據規程進行。因此培訓確認應強調規程實施的細節。為了便于確認雇員在與其工作相關規程方面的表現，建議以系統的方式實施培訓確認。
H．3．1 評估手段
培訓確認規程寫好后，需設計評價手段以確認培訓的有效性。對雇員表現的評價要對照由實驗室/部門管理人員/監督或培訓機構制定的表現標準。可用于確認表現的各種“測量手段”有：
a） 對照培訓學習目的的評價；
b） 筆試；
c） 評價反應能力；
1） 相關領域的案例研究；
2） 問題；
3） 與規程有關的情形。
d） 對有關堆積口頭詢問的反應；
e） 測試。
1） 盲試樣；
2） 熟練測試樣；
3） 以前分析試樣。
在進行評估前，各參加人須得到成就可接受水平的預定及驗證標準。此外，評價與確認手段就公布并交各參加人審議。
H．3．2 文件
培訓結果文件可能得到不同系統的支持。雇員記錄的制作與格式上的一致性對于培訓確認是很重要的。
確認文件應符合法規和認可要求與標準，及組織（雇員）和/或部門政策，每個實驗室/部門服務與指導原則。
H．3．2．1 記錄保留
記錄還應以清楚的書面形式保留，記有以下內容：
a） 受訓人身份；
b） 培訓負責人；
c） 記錄存放處及掌管人；
d） 記錄可以銷毀的時間；
e） 審定記錄的時間與方法。
前言
ISO為全球各國標準化團體（ISO會員團體）的聯合會。其國際標準工作的開展一般是由ISO各技術委員會進行，每個會員團體，如對技術委員會的某一課題感興趣，均有權成為該技術委員會的代表。任何與ISO保持聯系的國際組織，無論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項工作。ISO與國際電氣技術委員會（IES）在電氣技術標準化的各領域進行緊密合作。
國際標準草案經技術委員會認可后，送各會員團體傳閱，以待表決。草案作為國際標準頒布至少需要75%的會員罷休對其投贊成票。
國際標準ISO 14698-3由ISO/TC209技術委員會（潔凈室及相關受控環境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關受控環境的總標題下，由以下各部分組成：
----第1部分：暫定標題：生物污染控制---總則
----第2部分：暫定標題：生物污染控制---生物污染數據的評定和說明
----第3部分：暫定標題：生物污染控制---對載有生物污染的濕性培養基或生物膜之惰性表面進行清洗和/或消毒過程的效率測量方法
用戶注意，第1到第3部分的標題是出版第1部分時采用的工作標題。如果其中一項或多項標準被從工作計劃中刪除，則需對其余的標題重新加以編號。
前言
ISO為全球各國標準化團體（ISO會員團體）的聯合會。其國際標準工作的開展一般是由ISO各技術委員會進行，每個會員團體，如對技術委員會的某一課題感興趣，均有權成為該技術委員會的代表。任何與ISO保持聯系的國際組織，無論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項工作。ISO與國際電氣技術委員會（IES）在電氣技術標準化的各領域進行緊密合作。
國際標準草案經技術委員會認可后，送各會員團體傳閱，以待表決。草案作為國際標準頒布至少需要75%的會員罷休對其投贊成票。
國際標準ISO 14698-3由ISO/TC209技術委員會（潔凈室及相關受控環境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關受控環境的總標題下，由以下各部分組成：
----第1部分：暫定標題：生物污染控制---總則
----第2部分：暫定標題：生物污染控制---生物污染數據的評定和說明
----第3部分：暫定標題：生物污染控制---對載有生物污染的濕性培養基或生物膜之惰性表面進行清洗和/或消毒過程的效率測量方法
用戶注意，第1到第3部分的標題是出版第1部分時采用的工作標題。如果其中一項或多項標準被從工作計劃中刪除，則需對其余的標題重新加以編號。
引言
本ISO標準是說明以實驗室法測試清洗或消毒操作效率的導則，可以單項操作或多項操作并用的方式應用于惰性材料表面，這是指模擬在現場實際粒子分布條件下，被污染利帶有微生物(可能形成生物膜)的潮濕表面，這些方法最終應用于每一項產品和操作。本標準可應用于上述應用領域工業部門內各締約方(供貨商和用戶)之間的合同關系中。
本標準不同于其它以病菌載體法測量接觸殺菌劑活性的標準，也不同于說明表面懸浮消毒過程活性測量方法的標準，例如噴霧。應理解到上述標準是闡述測量產品內在活性的技術(雖然上述第2類標準中涉及氣溶膠發生器)，但本標準評估測量下列一種或數種活性綜合效應的方法，例如：
a)漂洗；
b)清洗；
c)消毒：
d)清洗與消毒同時采用：
e)生化作用；
g)機械作用。
本標準一般允許對一種過程采用一種方法識別(必要時)，此過程足指微生物以特定方法被清除和清洗的過程，也是指對培養基和培養基中含有的微生物被清除和清洗的過程，其它有關設備清洗和消毒的測量方法業已公布，其中有些已列入參考文獻，可作進一步查閱。
1 范圍
本ISO標準用于檢驗與下列一種或數種作用相聯系的過程，如漂洗、清洗、消毒，清洗和消毒兼用、生化作用、機械作用等。本標準闡明在潔凈室和相關受控環境，對微生物繁殖污染(無論是否形成生物膜)的潮濕表面，進行漂洗：和／或清洗：和／或消毒：和／或清洗、消毒兼用處理過程的效率測量原理。
在相應的場合下，IS014698的本部分可延伸與IS014698系列的其它標準及其附錄配合使用。
2 規定參考文獻
在本國際標準中列入本文參考文獻的多項條款，也被下列標準所采納．在出版時，應注明其有效版本。對所有標準均要加以檢查，應鼓勵各國際標準協議參與或尋求使用更新版本的下列標準的可能性。IEc和ISO組織成員應保存現行有效的國際標準登錄本。
IS0862：1984 表面活性劑——詞匯
3 定義
在本標準內，對微生物領域通用術語和表達式不再重新定義。應用本國際標準時，采用下列定義：
3．1 生物膜(biofilm)
封閉在外微孔聚合物內的微生物群體，并粘附在表面上。
注：生物膜會在非滅菌條件下，處理有機物質的房間、設備和機器的潮濕表面上繁殖（即在醫藥、航天、或食品工廠、醫院、廚房、水管、通風管道等處)。
3．2效率(efficiency)
清洗消毒的效率，或是單獨或綜合發揮這些作用的過程效率，它以10為底的對數表示的初始值與最終值的分離濃度之比(參閱3．7)，效率用E表示。
注：效率為無量綱，是數量級的相減數，也就是10的指數的濃度。
實例：
3. 3 清洗(cleaning)
對表面污染實施清除、溶解或驅散的作用。
注：可采用下列1種或數種方式實施清洗：
——物理化學的(洗滌作用)
——化學的(如氫氧化鈉)
——生化的(如酶)
——物理的(如用刷子刷或水管沖洗所產生的剪叨力)
3．4 過程(Proass)
為達到一定效果而規定的一組同時或順序實施的操作。
注：本標準用檢查下列一種或數種活動有關的過程：沖洗，清洗,消毒，清洗和消毒兼用，生化作用和機械作用。
3．5 沖洗(rinsing)
利用液體，一般是水實施清洗作用
3．6 培養基(soiling)
在某些場合是溶解培養基的作用。
注： 本標準僅考慮濕培養基，培養基含有的有機物質，僅有對微生物富有營養的物質組成，并在水的活動呈現時，能使微生物繁殖。
3．7 示蹤劑(tracer)
用于測量培養基繁殖數量的基材或有機微生物。
注l：為了測量過程的效率，在培養基中己繁殖的有機微生物，無論其是否形成生物膜，均可作為示蹤劑。
注2：通過清洗，沖洗的作用和生化或機械作用清除培養基或生物膜．消毒的目的限定為去除有機微生物或使有機微生物失去活性．因此，最理想的是在過程的整個效率方面，測量清除作用所產生的效率，以便與破壞(消滅)作用區別開來。為此，可選用一種或多種附加示蹤劑，包括天然存在于培養基中或添加進去，但應不易被消除的示蹤劑．
4 測試方法
4．1 通則
本標準的應用可分成下列各階段
4．1．1 測試培養基的應用和(選項)生物膜的形成
可將含有有機物和具有下列特性的培養基，以常規的和可重復的方式放置在測試表面上：
a) 測試培養基與被考察活動的現場或應用中發現的滋生床相類似。
b) 測試培養基含有實用的微生物群落標本，并能繁殖或形成生物膜。必要時，測試培養基將含有一種或多種附加示蹤劑。
c) 如有必要時，測試培養基可含有用于測量清洗效率的一種或多種附加示蹤劑。
d) 培養劑沉積后，在代表相應使用場所的溫度和相對濕度的條件下，隨著時間的推移，應在培養基表面被孵化，進而使有機微生物繁殖并(有選擇地)粘附在表面并在合成的外微孔聚合物上，形成生物膜。
4．1．2過程的實施
應采用與實際場所完全相同的方式實施此過程，必要時，可停止有機微生物的破壞，即刻實施該過程，但要采用中和劑。采用適當的技術措施，中和劑對被用的每種有機微生物應予先被認證。同時在執行測試的相同期間應重復被認證。認證的結果應列入測試報告。
4．1．3 示蹤劑的計數
在示蹤劑由表面上除下來之后，采用一種或多種被認證的技術對一種或多種示蹤劑進行計數(尤其是在測試培養基上有機微生物或形成的生物膜。
4．2 測試設備和儀表
4．2，l 通用設備和儀表
在本文中對微生物學中通用的設備和儀表不再加以說明。
4．2．2 測試培養基
測試培養基應具有相應使用場所的代表性，并能以最簡便的方式得到實現。例如，在檢驗肉類加工工業的清洗過程時，便采用肉糜；在乳酪工廠，便采用可溶解于相應溶液中的乳酪。
4．2．3 測試培養基粘附器
測試培養基所采用的設備應為用戶提供下列可能性：
——控制單位表面所承受的培養劑質量
——可正常復制單位表面的上述質量
如果采用液體測試培養基，應使表面復蓋均勻的厚度。如果采用非液體測試培養基．則應在恒速恒壓的條件下涂復表面。
4．2．4 微生物生物膜示蹤劑 ，
為了測量過程效率，可采用在測試培養基中繁殖的有機微生物，或己形成的生物膜，在任何情況下，這些有機微生物應：
——在相應應用場所具有代表性：
——應取自與被檢的過程相適應的那種類型的表面：
——在測試培養基中均質擴散
微生物示蹤劑可由一種或數種菌類或菌株組成。如果采用正式清單中未列出的菌株，則應將其存放在測試實驗室內。
4．2．5清洗示蹤劑
為了測量清洗作用對過程所產生的全部效率，可選用下列各項：
a)天然存在于培養基中的組成成份，采用與其相適應的測量技術；
b)添加入測試培養基中的物質(例如放射性指示劑)：
c)孢子狀有機微生物，優先采用親溫細菌，例如硬脂親溫桿菌；
示蹤劑均質地擴散于測試培養基中。
4. 2. 6 表面
污染表面的材料應與現場評估過程中所采用的表面材料相一致。試樣的大小應與選用的測試培養基粘附器相適應，并要相當小，便于裝進超聲處理槽（參閱4.2.8）內。將試樣并列排放在平整的表面上。受檢驗的測試表面，即試樣的基片要既無裂縫，又不粗糙不平，不妨礙測試培養基的平滑應用。
4．2．7 培養箱
培養箱應是調溫的，并能調節基相對濕度。還可采取適當手段使測試箱中的空氣受到水蒸汽飽和處理。
4. 2. 8 計數示蹤劑的回收
示蹤劑量的回收技術應可以重復實施的。既能保證全部示蹤劑的回收，也可做到其已知劑量和恒定比例的回收。
如果可以的話，可采用超聲處理槽將測試培養劑從計數表面上分離下來。注意，但必須精確了介超聲處理槽：
——一個或多個超聲源的位置；
——建議采用既適用于超聲處理槽，又適用于放置試樣表面的容器的液體；
——建議采用適宜于上述容器的材料組分。
4．3 程序測試包括下列各步驟
選定的測試培養基與予期在測試中繁殖的有機微生物和選定的示蹤劑都要均勻混合。
4．3．2 測試培養基在測試表面上的涂復
采用粘附器將測試培養基均勻地涂復在試樣表面及基片上(參閱4．2．3)。均勻的涂復層既可用稱量涂復前后的試樣的方式鑒別，也可用肉眼檢查培養基表面的方式加以鑒別。
4．3．3 生物膜的孵化和形成試樣及其基片應在適宜有機微土物生長和生物膜形成的溫度和相對濕度的條件下，孵化一段時間，此處的有機微生物是指予期在測試中需要繁殖的品種或形成生物膜。
4．3．4 測試過程的實施
試樣及其基片經孵化后要經受測試過程。必要時，要利用中和劑停止滅菌劑的活化，隨后立即實施操作過程。將試樣毫不延誤地送至實驗室逆行分聽。
4．3 示蹤劑的計數
要采用有效的拄術對示蹤劑講行計數。
將示蹤劑從測試表面上分離下來之后，便可對示蹤劑進行計數。在此情況下，應將試樣表面送至實驗室，就在實驗室內得到繁殖的或形成生物膜的有機微生物連同示蹤劑，以適當的方式一起分離下來。例如，將有機微生物浸入超聲處理槽內的回收液罐內，即可回收有機微生物，事先應對選定的分離方法進行論證，確定該方法對此類有機微生物無不良影響，并確信采用這種分離方法，能恰當地使全部有機微生物從表面上分離下來。
4．4 結果的表達
按照測得的效率表達測試結果，依據測試狀況，該效串為：
a)過程效率——利用選定繁殖或形成生物摸的微生物示蹤劑測得(參閱4．2．4)
b) 清洗效率——采用清潔示蹤刑法測得：
c) 滅菌效串——過程效率和清洗效率之差異，
4．5 測試報告
應根據本標準編制記錄報告，該報告至少應包括下列各部分內容：
a)實驗室的鑒定：
b)過程的說明；
1)所用產品的名稱；
2)使用模式：
c)實驗條件，特別要說明全部細節：
1)測試用培養劑：
2)有機微生物；
3)示蹤劑：
4)測試表面(材料和表面條件，試樣尺寸，培養基大小)，
5)培養劑技術及其重復性(單位表面的質量，外觀)：
6)孵化（時間、溫度、相對濕度)：
7)計數技術，必要時，還包括有效的回收示蹤劑技術：
8)測試完成時要采取滅菌劑中和處理，但也要適合測試條件：
d)結果：
e)下列短浯：“讀者注意到這一事實，此處所列各項測試結果只能與在嚴格同條件下所取得的測試結果相對照”；
f)結論：
e)日期和簽署：
參考書目錄
l、Brouilland- Delattre，A.，Kobilinsky，A.，Cerf．0．1994．Mesure de l'efficacit’e desproced's de nettoyage et de desinfection des surfaces ourertes，Le Lair，74，79—88，進一步可參閱下列書刊<略>
